據(jù)Elisa試劑盒技術(shù)報道：

γ-干擾素(IFN-γ)是機體內(nèi)具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能的重要細胞因子。研究表明,內(nèi)源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映機體的細 胞免疫狀態(tài),因此對樣本中的IFN-γ進行定量分析,在免疫機制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果評估、器官移植、過敏反應(yīng)以及多種胞內(nèi)病原感染的診斷等 方面都具有極其重要的理論價值和應(yīng)用價值。

近日，內(nèi)蒙古大學(xué)對干擾素檢測法有了新的突破。本實驗旨在制備雞γ-干擾素(ChIFN-γ)單克隆抗體并建立對雞γ-干擾素的定量ELISA檢測方法。 本研究利用在大腸埃希氏菌中原核表達的雞γ-干擾素(rChIFN-γ)免疫8周齡BALB/c鼠3次后,按標(biāo)準(zhǔn)程序融合后,以昆蟲細胞表達的 rChIFN-γ作為檢測抗原,通過間接ELISA和有限稀釋法篩選了陽性雜交瘤細胞株,利用陽性的雜交瘤細胞制備腹水單抗并測定其效價,通過Western-blot和單抗中和試驗分析了rChIFN-γ與單抗之間的特異性。對單抗IgG進行了HRP,FITC及生物素標(biāo)記,測定了三種標(biāo)記單 抗的效價。在測定原核表達rChIFN-γ的濃度和滴定昆蟲細胞表達rChIFN-γ的抗病毒的活性的基礎(chǔ)上,建立了雞γ-干擾素的定量ELISA檢測方 法。通過ConA刺激SPF雞脾淋巴細胞產(chǎn)生了IFN-γ,并利用FITC標(biāo)記的單抗對其進行了初染。 通過以上試驗獲得了一株能夠穩(wěn)定分泌抗雞γ-干擾素單克隆抗體的雜交瘤細胞株,該株單抗命名為G1株,其腹水效價為1:1×105。Western- blot分析和單抗中和試驗表明抗原抗體之間有很好的特異性;對單抗IgG進行HRP,FITC及生物素標(biāo)記效價分別達到 1:5000,1:100,1:5000。利用純化的單抗對原核表達rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回歸方程為 y=2.2742*x+0.105,回歸系數(shù)R=0.975,zui低檢測濃度為15ng/ml,批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)均小于10%。利用昆蟲細胞表達 rChIFN-γ建立的定量ELISA,其回歸方程為y=0.1164*x-0.1281,回歸系數(shù)R=0.9539。ICC初染結(jié)果為按10μg/ml 的ConA刺激雞脾淋巴細胞,分泌的雞IFN-γ的陽性率為1.71%。 結(jié)論:本實驗制備的抗雞γ-干擾素單克隆抗體性質(zhì)穩(wěn)定,腹水單抗效價高,利用HRP,FITC及生物素標(biāo)記的單抗IgG的效價均達到有效的使用效價。重組 雞γ-干擾素對單抗繪制OD值-抗原濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線具有良好的線型關(guān)系,且二者之間具有較好的特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性。ICC初染試驗表明本實驗制備的單抗 能夠與天然的雞γ-干擾素發(fā)生特異性反應(yīng)。

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