Elisa實驗中牛奶樣本收集方法

ELISA技術的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。

牛奶和奶粉前處理方法

（a）牛奶前處理方法

┅┅取牛奶樣本，3000g以上，10℃離心10min，吸除上層脂肪；

┅┅取5ml去除脂肪牛奶樣本至10ml聚苯乙烯離心管中，加入150ulC液（見配液1）出現(xiàn)沉淀，振蕩15s，再加入150ulD液（見配液2），振蕩1min充分混合；

┅┅3000g以上，15℃離心10min，移取上層液；

┅┅用復溶工作液（見配液6）以等體積稀釋上層液（1份上層液+1份復溶工作液）；

┅┅取50ul用于分析。

注：如果離心后仍然渾濁，再重復脫脂過程。   

（b）牛奶前處理方法

┅┅取牛奶樣本,3000g以上,10℃離心10min,吸除上層脂肪；

┅┅取5ml去除脂肪牛奶樣本至10ml聚苯乙烯離心管中，加入250ulC液（見配液1）和250ulD液（見配液2）充分混合，3000g以上，4～12℃離心10min。（如沒有冷凍離心機，請預先將樣本冷卻到8℃再進行離心）；

┅┅移取2.2ml上層液（相當于2ml奶樣）至另一個10ml聚苯乙烯離心管中，加入4ml乙酸乙酯上下振蕩10min；

┅┅3000g以上，室溫（20-25℃）離心10min ；

┅┅移取2ml乙酸乙酯上層有機相（相當于1ml奶樣），至10ml干凈的玻璃試管中，于50～60℃水浴氮氣流下吹干；

┅┅加入0.5ml復溶工作液（見配液6），渦動2min溶解干燥的殘留物；

┅┅取50ul用于分析。

由于陰性樣本可能會產(chǎn)生背景干擾 （在某些情況下干擾數(shù)值在標準2到3之間），所以推薦0.15ppb作為陽性結(jié)果的cut off判斷值。